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    WB電泳技巧分享

    發(fā)布時(shí)間: 2021-09-14  點(diǎn)擊次數(shù): 5270次

    ① 清洗玻璃板,去離子水沖,風(fēng)干或烤干(一定要以處女座的精神去嚴(yán)格要求自己把板子洗干凈,相當(dāng)重要) 

    ② 按說(shuō)明書配膠。先配下膠(分離膠),一般兩塊板配 10ml 的 10%的膠(20~80kDa 通用)膠的濃度根據(jù)你所需要跑的蛋白的分子量大小決定,混勻后灌膠,立即用正丁醇或無(wú)水乙醇封,待凝固后倒出正丁醇,用去離子水沖洗,濾紙吸干;③ 配上膠(積層膠),參考說(shuō)明書,一般兩塊板配 4ml 的 5%的膠,混勻后灌膠,插板,待凝固。(可 4°過(guò)夜) 

    ④ 配電泳液(tris3.03g,甘氨酸 14.4g,SDS1g,定容至 1L) 

    ⑤ 將玻璃板裝好放入電泳槽中,加電泳液,輕輕拔梳。 

    ⑥ 上樣(這是每個(gè)WB達(dá)人最能裝逼的一個(gè)環(huán)節(jié),高手會(huì)告訴你憑感覺(jué)加樣連孔都不用看) 

    ⑦ 連接電源,一定要注意紅對(duì)紅,黑對(duì)黑,定電壓和時(shí)間,上膠(90v,約 40min,maker 分出條帶),換壓,下膠(120v,2h)。(不要讓溴酚藍(lán)跑出去)


    經(jīng)驗(yàn)總結(jié):

    想要條帶跑的好看點(diǎn),最好把上膠稍微配高一點(diǎn)。

    換電壓主要是看溴酚藍(lán)有沒(méi)有跑到下膠,沒(méi)有確定的時(shí)間點(diǎn)。

    膠最好現(xiàn)配現(xiàn)用,如果需要保存最好用濕潤(rùn)的保鮮膜包好。


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