1 概述

除了差速離心，實(shí)驗(yàn)室中分離生物材料還有密度梯度離心法。

此法又可以分為速率區(qū)帶離心和等密度離心，都需要制備梯度材料，將待分離物加入梯度材料后通過一定離心力將不同生物顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶。

• 速率區(qū)帶離心：僅能分離沉降系數(shù)差≤20%的顆粒或分子量相差能達(dá)到3倍的蛋白質(zhì)。此法與顆粒密度無關(guān)。適用于分離密度相同而大小不同的物質(zhì)。

• 等密度離心：此法通過梯度介質(zhì)產(chǎn)生能夠覆蓋待分離物質(zhì)密度范圍的密度梯度，通過離心使不同密度的顆粒懸浮到相應(yīng)的介質(zhì)密度區(qū)。顆粒的密度是影響最終位置的僅有因素，只要被分離顆粒間的密度差異大于1%就可用此法分離。適用于分離大小接近而密度差異較大的物質(zhì)。

因此我們可以發(fā)現(xiàn)，用來形成梯度的材料（介質(zhì)）是離心成功的關(guān)鍵因素。以下將介紹如何選擇梯度材料。

2 梯度材料的選擇原則

理想的梯度材料最好能對(duì)以下幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì)進(jìn)行一個(gè)我全都要，但這是不可能的，只能根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的、被分離材料和實(shí)驗(yàn)室條件等進(jìn)行取舍：

• 是惰性材料，與被分離的生物材料不發(fā)生反應(yīng)，且易與所分離的生物粒子分開；

• 可達(dá)到要求的密度范圍，且在所要求的密度范圍內(nèi)具有較低的黏度和滲透壓，離子強(qiáng)度和pH變化較??；
  

• 無毒，不會(huì)腐蝕離心設(shè)備；
  

• 容易純化、價(jià)格便宜或容易回收；
  

• 濃度便于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測(cè)定，如具有折光率；
  

• 其物理性質(zhì)、熱力學(xué)性質(zhì)應(yīng)該是已知的，穩(wěn)定而不會(huì)因離心的條件與過程發(fā)生變化。

  
  

常見梯度材料參考

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