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    免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染若轉(zhuǎn)染效率不高的改進(jìn)方式

    發(fā)布時(shí)間: 2022-01-01  點(diǎn)擊次數(shù): 1415次
       免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑是一種新開發(fā)的試劑,用于將DNA和siRNA轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞系和各種原代細(xì)胞中。Zeta Life多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑的尺寸大小是傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑體積的1/10。本轉(zhuǎn)染試劑是通過(guò)細(xì)胞內(nèi)?和細(xì)胞主動(dòng)吸收進(jìn)入細(xì)胞,進(jìn)入后對(duì)細(xì)胞膜無(wú)物理性損傷,不易出現(xiàn)細(xì)胞變形,保持高的細(xì)胞活力,不激活細(xì)胞表面或細(xì)胞體內(nèi)marker,可反映真實(shí)的細(xì)胞通路蛋白原始數(shù)據(jù),可轉(zhuǎn)染免疫細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等。
      免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)使用優(yōu)質(zhì)質(zhì)粒:
      1.通過(guò)測(cè)量OD值來(lái)確定DNA純度和濃度,測(cè)得的OD值應(yīng)介于1.7-1.9之間。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染基于電荷吸引原理,如果DNA不純,如帶少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成及轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。
      2.含有內(nèi)毒素的質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞有很大的毒性作用。轉(zhuǎn)染時(shí),小心輕柔的將lipo2000加到培養(yǎng)基中并輕輕混勻,避免粗暴用力吹打,會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體失效。
      免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染后發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率不高,可以通過(guò)兩種方法改進(jìn):
      1.復(fù)轉(zhuǎn)染,即轉(zhuǎn)染后12-24小時(shí)再次進(jìn)行轉(zhuǎn)染,前提是該細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的耐受性較好,轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡數(shù)較少。
      2.通過(guò)藥篩來(lái)殺死未轉(zhuǎn)入成功的細(xì)胞。前提是該質(zhì)粒帶有抗生素抗性的基因。
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