單片段無縫克隆試劑盒（克隆突變）
更新時間：2025-01-13
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單片段無縫克隆試劑盒（克隆突變）
產品介紹：
1. 產品描述：
信勵致和®單片段無縫克隆試劑盒基于DNA序列同源性進行片段重組，可快速將單個片段定向克隆到任意線性化載體中。本試劑盒含有的2×單片段無縫克隆混合液可將載體和片段的同源區(qū)域從雙鏈的3' 端進行重組連接，最終得到的無缺口閉環(huán)質?？芍苯愚D化，完成定向克隆。該試劑盒克服了酶切位點的限制，僅需在插入片段PCR引物5' 端引入線性化載體的末端序列，使得插入片段5' 端和3' 端帶有線性化載體兩端一致的序列（15~25 bp），即可實現(xiàn)插入片段的定向重組。重組反應可在恒溫條件下快速進行（50 ℃處理15 min），配合靈活的PCR 產物處理方式和快速轉化方法，數(shù)小時內即可完成從DNA樣品準備到重組產物的轉化涂板培養(yǎng)的全部操作。
2. 產品特點：
（1）無需考慮酶切位點，基于序列同源性反應15 min即可實現(xiàn)載體與片段的快速重組。
（2）插入片段的PCR產物正確且單一，無需純化，可直接與載體進行重組反應。
（3）可以選擇性進行 5 min快速轉化 E.coli 感受態(tài)細胞。
單片段無縫克隆試劑盒（克隆突變）
使用說明：
1. 產品組分：
組分/含量 | AB0141 | AB0142 |
2×單片段無縫克隆混合液 | 250 μL | 500 μL |
500 bp平末端對照片段(20ng/μL) | 5 μL | 5 μL |
pUC19線性化載體(50 ng/uL) | 5 μL | 5 μL |
2. 儲運條件：
-25~-15℃存儲，有效期12個月，干冰運輸。
3. 注意事項：
（1）片段擴增用模板、引物、線性化載體、高保真聚合酶、感受態(tài)細胞、ddH2O需要自備。
（2）重組產物冰上冷卻后，可直接轉化化學感受態(tài)細胞，進行轉化時，重組產物轉化體積最多不應超過所用感受態(tài)細胞體積的1/10。
（3）純化或回收的載體或目的片段品質較差會顯著降低克隆陽性率。
（4）菌落少時，建議轉化時適當增加重組產物的量，或者增加菌液涂布量。
（5）隨著重組質粒長度的增加，克隆效率降低。
